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一.篩選

    誘變育種包括誘變和篩選兩個(gè)過程，在誘變育種中突變是隨機(jī)的，但篩選是定向的。篩選的條件決定選育的方向，因?yàn)橥蛔凅w高產(chǎn)性能等優(yōu)良特性總是在一定的培養(yǎng)條件下才能表現(xiàn)出來。培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件是決定菌種某些特性保留或淘汰的篩子。ELISA試劑盒

1.篩選方案

    在誘變育種中，為了提高篩選效率，往往將篩選工作分為初篩和復(fù)篩兩步進(jìn)行。初篩的目的是刪去明確不符合要求的大部分菌株，把性狀類似的菌株盡量保留下來，使優(yōu)良菌種不至于漏網(wǎng)。因此，初篩工作以量為主，測定的性還在其次。初篩的手段應(yīng)盡可能快速、簡單。復(fù)篩的目的是確認(rèn)符合要求的菌株，所以，復(fù)篩步驟以質(zhì)為主，應(yīng)測定每個(gè)菌株的指標(biāo)。由于誘變產(chǎn)生高產(chǎn)突變株的頻率很低，而且實(shí)驗(yàn)誤差又在所難免·因此，在篩選工作中常采用多級水平篩選，有利于獲得優(yōu)良菌株。多級水平篩選的原則是讓誘變后的微生物群體相繼通過一系列的篩選．每級只選取一定百分比的變異株，使被篩選的菌株逐步濃縮。如在工作量限度為20O只搖瓶的具體條件下，為了取得zui大的效果，有人提出以下的篩選方案。

第三輪、第四輪……(操作同上)。

    初篩和復(fù)篩工作可以連續(xù)進(jìn)行多輪，直到獲得較好的菌株為止。采用這種篩選方案，不僅能以較少的工作量獲得良好的效果，而且，還可使某些眼前產(chǎn)量雖不很高，但有發(fā)展前途的優(yōu)良菌株不至于落選。

    通過以上篩選方案將挑選的菌落移種斜面培養(yǎng)后直接接入搖瓶培養(yǎng)，發(fā)酵產(chǎn)物采用常規(guī)法進(jìn)行測定．這種篩選方法稱為常規(guī)篩選法。

    為了進(jìn)一步提高篩選效率，可以在常規(guī)篩選法基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)：一方面分離到平皿上的菌落采用瓊脂塊法進(jìn)行預(yù)篩選；另一方面，初篩搖瓶發(fā)酵液中產(chǎn)物分析，采用簡便、快速的瓊脂平板測定法或其他簡便方法。ELISA試劑盒

2.篩選方法

    篩選方法可以分為隨機(jī)篩選和平板菌落預(yù)篩選。隨機(jī)篩選是指隨機(jī)挑選平板菌落進(jìn)行搖瓶篩選。平板菌落預(yù)篩選是根據(jù)特定代謝產(chǎn)物的特異性，在瓊脂平板上設(shè)計(jì)一些巧妙的篩選方法和活性粗測方法用于誘變后從試樣中檢出突變株的一種瓊脂平板篩選法。平板菌落預(yù)篩選主要采用以下幾種方法。

(1)根據(jù)形態(tài)變異進(jìn)行預(yù)篩選研究不同菌落形態(tài)與能力之間的關(guān)系，在進(jìn)行搖瓶篩選前，先根據(jù)菌落形態(tài)進(jìn)行一次預(yù)篩選，即淘汰低產(chǎn)菌落形態(tài)的菌落，挑取高產(chǎn)菌落形態(tài)的菌落接種斜面，進(jìn)行搖瓶篩選。在根據(jù)菌落形態(tài)進(jìn)行預(yù)篩選時(shí)要注意，往往一些不為人注意的微小變化卻是高產(chǎn)的源頭。

(2)根據(jù)平板菌落生化反應(yīng)直接挑取突變株

①平板菌落直接選育法單孢子懸浮液經(jīng)誘變后的存活孢子，經(jīng)適當(dāng)稀釋后涂布于平板上培養(yǎng)，待平板菌落長好后噴射檢定菌，再繼續(xù)培養(yǎng)18h，以抑菌圈直徑與菌落直徑之比為指標(biāo)進(jìn)行篩選。

②采用指示劑篩選高產(chǎn)菌株 如產(chǎn)生菌的平板預(yù)篩法，常在培養(yǎng)基中加入溴百里酚藍(lán)指示劑，培養(yǎng)后在藍(lán)色平板菌落周圍出現(xiàn)黃色，測定其直徑大小，初步選出優(yōu)良的突變株。

③采用冷敏感菌株篩選抗生素突變株 以冷敏感菌為檢驗(yàn)菌，它在20℃下不生長，而放線菌能生長。因此，可將單孢子懸浮液經(jīng)誘變后的存活孢子和冷敏感檢驗(yàn)菌一起涂布于平板上，在20℃下培養(yǎng)，待菌落培養(yǎng)成熟后．再在37℃下培養(yǎng)18h左右，以抑菌圈直徑與菌落直徑之比為指標(biāo)進(jìn)行篩選。

④用于酶類產(chǎn)生菌的平板預(yù)篩法用于產(chǎn)生菌的平板預(yù)篩法：以淀粉為底物制成平板，誘變后的菌體涂布平板，菌落形成后，用碘液浸涂，根據(jù)菌落周圍形成的無變色區(qū)大小決定取舍。

    蛋白酶產(chǎn)生菌的平板預(yù)篩法：以酪素為底物制成平板，誘變后的菌體涂布平板，根據(jù)菌落周圍形成的透明圈大小決定取舍。

(3)濃度梯度法抗生素產(chǎn)生菌合成抗生素的能力與其對自身抗生素的抗性有關(guān)。一般來說，抗生素產(chǎn)生菌對自身抗生素的抗性越高，其能力也越高。篩選抗生素抗性突變株可用濃度梯度法，即在含抗生素的濃度梯度平板上篩選抗生素抗性菌株。濃度梯度平板的制備及平板上菌落生長情況。

(4)瓊脂塊法春雷霉素瓊脂塊預(yù)篩選法。選擇一種既有利于菌體生長．又能滿足產(chǎn)物形成的培養(yǎng)基制成平板，當(dāng)菌落剛長出時(shí)，即用打孔器將菌落取出，轉(zhuǎn)移到空白的無菌平板培養(yǎng)，培養(yǎng)成熟后再轉(zhuǎn)移到檢定平板(含敏感菌或底物)上，培養(yǎng)一定時(shí)間后，測量瓊脂塊周圍形成的抑菌圈或水解圈大小。

    瓊脂塊法比一般直接分離在平皿上判斷活性的反應(yīng)圈要準(zhǔn)確。所有菌落都在同一面積的瓊脂塊上，避免相互間的干擾。每個(gè)菌落的產(chǎn)物都在同一體積的瓊脂塊中，避免由于擴(kuò)散不同而造成的誤差。瓊脂塊法的zui大優(yōu)點(diǎn)是可以大幅度增加篩選量。其不足之處是培養(yǎng)條件與發(fā)酵有很大差別，易造成漏選。ELISA試劑盒

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