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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

•  能夠在多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型中均勻染色細(xì)胞膜，不論是活細(xì)胞和固定細(xì)胞，懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞。

•  針試劑盒針對(duì)各種熒光分析平臺(tái)進(jìn)行了優(yōu)化，具有廣泛的適用性，如熒光微孔板分析，流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡等。

•  的CPM Orange•  (Ex/Em = 549/569 nm)-在膜內(nèi)快速擴(kuò)散，在用甲醛固定后也能保持染色，適用于熒光多標(biāo)實(shí)驗(yàn)。

保存建議:請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū)中各個(gè)組分的存儲(chǔ)條件。自發(fā)貨之日起，在推薦溫度下至少穩(wěn)定6個(gè)月。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

細(xì)胞膜(質(zhì)膜)是一種薄的半透膜，由含有嵌入蛋白質(zhì)的脂質(zhì)雙層組成，將所有細(xì)胞的內(nèi)部與環(huán)境隔開(kāi)。細(xì)胞膜的基本功能是保護(hù)細(xì)胞免受周圍環(huán)境的影響。細(xì)胞膜控制物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞和細(xì)胞器的運(yùn)動(dòng)。這樣，它可選擇性地滲透離子和有機(jī)分子。細(xì)胞膜參與多種細(xì)胞過(guò)程，如細(xì)胞粘附、離子傳導(dǎo)和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，并作為幾種細(xì)胞外結(jié)構(gòu)的附著表面，包括細(xì)胞壁、糖萼和細(xì)胞內(nèi)骨架。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

Adenylate Kinase 1 (AK-1 0.5mgAdenylate Kinase 1 (AK-1) 腺苷酸激酶-1

FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated

FCGR4重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽) Protein

CLEC1A Protein Rat 重組大鼠 CLEC1A / CLEC-1 蛋白

FAM19A2重組人 FAM19A2 蛋白  Protein

小鼠二0酸腺苷(ADP)ELISA 試劑盒

Rat endostatin (ES) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮抑素(ES)檢測(cè)試劑盒

HumanactivatedcoagulationfactorⅫ,FⅫaELISAKit 人活化Ⅻ(FⅫa)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

Humanapoptosissignalregulatingkinase1,ASK-1檢測(cè)試劑盒人凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)檢測(cè)試劑盒

植物乙醇酸氧化酶(glycolateoxidase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Humaissueinhibitorsofmetalloproteinase2，TIMP-2ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)檢測(cè)試劑盒

(Fibrinogen)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

人 Foxp3(Foxp3)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

半乳糖凝集素 7 （ Galectin-7 ）   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

胃泌素 (Gasin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

大鼠誘導(dǎo)型合酶(NOS2)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： NOS2 ELISA Kit

Mouse follistatin (FS) ELISA Kit 小鼠卵泡抑素(FS)檢測(cè)試劑盒

Mousemaixmetalloproteinase3,MMP-3ELISAkit 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanEamoebahistolyticaAigenELISAKit人痢疾內(nèi)阿米巴抗原

細(xì)胞3-0酸甘油脫氫酶(GAPDH)活性酶動(dòng)力比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitACV-RAb大鼠活化素A受體抗體

細(xì)胞膜染色試劑盒（橘紅色熒光）FCGR4重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽) Protein

Adenylate Kinase 1 (AK-1 0.5mgAdenylate Kinase 1 (AK-1) 腺苷酸激酶-1

FAM19A2重組人 FAM19A2 蛋白  Protein

FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated

CLEC1A Protein Rat 重組大鼠 CLEC1A / CLEC-1 蛋白

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。