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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠心肌分離自心臟組織；心臟是脊椎動物身體中重要的一個器官，主要功能是為血液流動提供壓力，把血液運行至身體各個部分。心臟由心肌構(gòu)成，左心房、左心室、右心房、右心室四個腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣），這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心臟的作用是推動血液流動，向器官、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無機鹽、尿素和尿酸等），使細胞維持正常的代謝和功能。心肌細胞呈菱形、多邊形等不規(guī)則形狀；細胞培養(yǎng)2h后開始貼壁，呈梭形；到12h左右，細胞開始伸出偽足，呈菱形、多角形；分離培養(yǎng)48h以后，大部分伸出偽足、呈巴掌狀，部分心肌細胞會出現(xiàn)搏動；心肌細胞為終末分化細胞，在體外不增殖。體外培養(yǎng)的心肌細胞可保持結(jié)構(gòu)及功能上的某些特點，并具有自發(fā)性節(jié)律搏動，且心肌細胞的培養(yǎng)具有簡便、定量、重復(fù)性好以及不受神經(jīng)體液因素的影響等特點。利用培養(yǎng)的心肌細胞在探索非血液動力學(xué)因素所致的心肌肥厚的調(diào)節(jié)，研究心肌細胞的生物力學(xué)、凋亡、受體下調(diào)、缺血預(yù)處理、信號通路、對作用于心臟的新藥進行篩選并對其安全性進行評價以及從培養(yǎng)的心肌細胞中提取有價值的生物因子等方面具有廣闊的應(yīng)用前景，對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠心肌采用膠原酶-聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法，并用化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠心肌經(jīng)α-Sarcometric actin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠髓過氧化物酶試劑盒   小鼠髓過氧化物酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠髓過氧化物酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠髓過氧化物酶試劑盒、小鼠髓過氧化物酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠透明質(zhì)酸試劑盒   小鼠透明質(zhì)酸試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠透明質(zhì)酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠透明質(zhì)酸試劑盒、小鼠透明質(zhì)酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠脫氫表雄試劑盒   小鼠脫氫表雄試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠脫氫表雄試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠脫氫表雄試劑盒、小鼠脫氫表雄eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠戊糖素試劑盒   小鼠戊糖素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠戊糖素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠戊糖素試劑盒、小鼠戊糖素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat cyclic guanosine monophosphate (cGMP) ELISA Kit 大鼠環(huán)0酸鳥苷(cGMP)試劑盒

Humanoctameranscriptionfactor2B,OTF2BELISAKit 人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Chickenβ-lactamase試劑盒雞β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞βAMYLOID蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MouseEotaxin1ELISAKit小鼠嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)試劑盒規(guī)格：96T/48T

PDGFRA重組人 PDGFRa / CD140a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

原A(PGA)重組蛋白 Recombinant Pepsinogen A (PGA)

GH1重組人 GH1 / Growth hormone 1 蛋白 Protein

CHIT1 Protein Human 重組人 Chitotriosidase / Chitinase 1 / CHIT1 蛋白

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/New Caledonia/20/1999) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

原A(PGA)重組蛋白 Recombinant Pepsinogen A (PGA)

CHIT1 Protein Human 重組人 Chitotriosidase / Chitinase 1 / CHIT1 蛋白

PDGFRA重組人 PDGFRa / CD140a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/New Caledonia/20/1999) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

GH1重組人 GH1 / Growth hormone 1 蛋白 Protein

小鼠心肌細胞大鼠蛋白激酶Cε(PKCε)試劑盒 ，英文名： PKCε ELISA Kit

N- acetyl beta -D- Glucosaminidase (NAG) ELISA Kit 人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒

RatIerleukin16,IL-16ELISAKIT 大鼠白介素16(IL-16)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforCXCR3ELISAKit大鼠CXC趨化因子受體3

細胞色素P450亞酶CYP3A(END)活性比色法定量試劑盒20次

RatFactor-relatedApoptosis,FASELISAKit大鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)試劑盒規(guī)格：96T/48T