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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠嗅球分離自嗅球組織；嗅球是脊椎動(dòng)物前腦結(jié)構(gòu)中參與嗅覺(jué)的部分，用于感知?dú)馕丁Ｐ崆蚍譃槎€(gè)不同的結(jié)構(gòu)：主嗅球及輔助嗅球。在大腦額葉來(lái)自許多嗅細(xì)胞的神經(jīng)纖維纏集在一起，形成線球狀的部分。在這里，纖維與多個(gè)次級(jí)神經(jīng)元——僧帽細(xì)胞的樹(shù)突相連接，進(jìn)而由這里伸出神經(jīng)纖維形成嗅囊，終止于額葉下方。一般認(rèn)為它在嗅味的辨別中具有重要的功能。對(duì)于大部份的脊椎動(dòng)物而言，嗅球位在大腦的前面，不過(guò)人的嗅球位于大腦的內(nèi)部。嗅球由篩骨的篩板固定且保護(hù)嗅球，哺乳動(dòng)物的篩板會(huì)分隔嗅球和嗅上皮，而嗅神經(jīng)會(huì)穿過(guò)篩板中的篩孔而連接到嗅球。嗅球分為二個(gè)不同的結(jié)構(gòu)：主嗅球及輔助嗅球。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠嗅球采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠嗅球經(jīng)MAP-2免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2天半量換液1次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性：不傳代，不增殖，存活1-2周

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠嗅球體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶2(ERK2)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： ERK2 ELISA Kit

Mouse nerve growth guidance factor Slit2 ELISA Kit 小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)導(dǎo)向因子Slit2 檢測(cè)試劑盒

MouseCollageypeⅡ,ColⅡELISAKit 小鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HSV-IIgG單皰疹Ⅰ型病毒IgG(間接法二步法)

細(xì)胞ITK激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-3大鼠白介素3

SERPINB6B重組小鼠 Serpinb6b 蛋白 Protein

白介素12受體β2(IL2Rβ2)重組蛋白 Recombinant Interleukin 12 Receptor Beta 2 (IL12Rb2)

SAE1重組人 SAE1 蛋白 Protein

DPP10 Protein Human 重組人 DPP10 / DPRP3 蛋白

TNFSF4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 OX-40L / TNFSF4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)重組蛋白 Recombinant N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase (NAGase)

DPP10 Protein Human 重組人 DPP10 / DPRP3 蛋白

F9重組小鼠 Coagulation Factor IX / FIX / F9 蛋白 Protein

TNFRSF21 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 TNFRSF21 / DR6 蛋白

PTH重組人 PTH / PTH1 / Parathyroid Hormone 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

小鼠抗線粒體抗體M2亞型(AMA-M2)檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Human aldosterone (ALD) ELISA Kit 人固酮(ALD)檢測(cè)試劑盒

Humanisletamyloidpolypeptide,IAPPELISAKit 人胰島淀粉樣多肽(IAPP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAndrogenBindingProtein,ABP檢測(cè)試劑盒人雄激素結(jié)合蛋白(ABP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物二酚氧化酶(diphenolase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit猴載脂蛋白B100(apo-B100)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠嗅球細(xì)胞小鼠骨鈣素   英文名稱：   Osteocalcin   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   OC

小鼠抑瘤素   英文名稱：    M   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   OSM

小鼠催產(chǎn)素   英文名稱：   Oxytocin   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   OT

小鼠骨保護(hù)素配體   英文名稱：   Osteoprotegerin ligand   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   OPGL